肝胰腺微孢子虫病 (HPM) 是由细胞内微孢子虫肝对虾肠胞菌 (EHP) 引起的，已在几种对虾中报道，包括：斑节对虾和南美白对虾。并且，EHP已在不同地区报告，包括：中国、印度尼西亚、马来西亚、越南、泰国和印度等亚洲国家。最近，位于西半球的委内瑞拉也报道了EHP。

一、首次研究确定：虾便可能成为EHP传染途径

      EHP在肝胰腺 (HP) 小管上皮细胞中引起病变，其主要临床症状是：生长缓慢，导致大小不一。漂浮在池塘水面上的白便和虾胃肠道变白色，也与EHP相关。在疾病的晚期，感染EHP的虾通常表现出：软壳、嗜睡、摄食量减少、空肠空道和慢性死亡。

      在已报告EHP的国家，如：印度、中国、越南和委内瑞拉，对虾养殖是在广泛的环境条件下进行的，包括：沿海海域、河口地区和内陆地区。例如，在印度东部的一些州，如：安得拉邦，池塘充满了与河口水混合的钻井水，导致养成池塘的盐度在0到30ppt之间波动，平均盐度约10ppt。相比之下，在该国西部的各州，如：古吉拉特邦，池塘水中的盐度可能在30至44ppt之间变化。在委内瑞拉西北部，一些养虾场位于马拉开波湖周围，那里的盐度在2到5ppt之间，而在委内瑞拉东北部，池塘的盐度介于20至40ppt之间，据报道，在高盐度和低盐度环境中都存在EHP。在这两个国家，高盐环境下EHP的发病率似乎更高，但迄今为止还没有研究评估盐度与EHP存在之间的可能关系。

      今天，笔者报告了一项研究的结果，以三种不同的盐度比较了EHP的感染性。

二、研究设置

      1、生物测定在亚利桑那大学的水产养殖病理学实验室 (UA-APL) 进行。无特定病原体 (SPF)南美白对虾购自美国佛罗里达州的一家商业孵化场。过去两年，在UA-APL对SPF虾苗进行了筛查，没有发现包括EHP等疾病。

      2、研究分为两个的EHP挑战，在这两个挑战中，虾都维持在2ppt、15ppt和30ppt三种不同的盐度下。对于每个实验挑战，六个90升的水箱中装满了对应于三个盐度水平的人造海水，每种盐度有2组池塘。每天早上测量温度调整为25摄氏度 (±0.6)；每周测量一次pH值，范围为7.5-8.0。

      3、在每个水箱中分别抽取10尾SPF南美白对虾（2.0-2.1 克）用于实验EHP感染。

三、结果与讨论

      1、我们调查了三种盐度中EHP的患病率和严重程度：在实验室受挑战的条件下：高 (30ppt)、中 (15ppt) 和低 (2ppt)。组织病理学和 PCR 证实，在实验挑战中用作EHP接种源的粪便，足以让不同盐度下的虾生病。这项研究的结果提供了一种通过粪-口途径感染EHP的新方法。

      2、EHP挑战结束时的最终存活率很高，从90%到100%，在两个独立实验挑战的三个盐度中（表1）。在两个独立的挑战实验中，在所有盐度中，对照处理的存活率都是 100%。在3种不同盐度下，我们没有观察到暴露于EHP的虾的任何临床症状。

      3、挑战1中2ppt、15ppt和30ppt盐度的EHP的患病率分别为25%、33.3%和25%。在挑战2中，EHP在2ppt、15ppt和30ppt的患病率分别为33.3%、30.0%和87.5%。在第二个实验中，盐度为30ppt时严重程度更高。在挑战2中，30ppt的EHP感染虾群中有50%表现出G3级（中度至重度）和G4级（重度）病变。我们发现盐度与感染EHP的虾之间存在很强的关联，暴露于高盐度（30 ppt）的虾中EHP的患病率高于暴露于低盐度的虾（2ppt和15ppt的总和）。本研究中不同的严重程度如图1所示。

      4、以前的研究表明，一些感染途径包括同居、反向灌胃和直接肝胰腺注射EHP接种物。在这项研究中，我们首次报道了粪便可能是一种传染性污染途径。由于有害的行为和粪便中未消化的饲料（可能约为25%-30%）的存在，可以增加EHP的传播。

      5、维持在30ppt盐度的虾的组织学损伤更为严重。在50%受影响的虾中发现了中度至重度感染 (G3-G4)。相比之下，在盐度为2ppt的虾中，只有16%的虾表现出G3级感染水平，而在盐度为15ppt的虾中，只有0%的虾表现出G2-G4 级感染水平。三种不同盐度下EHP感染严重程度的差异，可能是由于盐度对孢子萌发的不同影响。孢子萌发的关键阶段之一是孢子内渗透压的增加。与30ppt的高渗环境相比，盐度的差异导致2ppt和15ppt 的低渗环境。

      6、硬度是本研究中使用的三种盐度不同的另一个变量，可能是影响孢子萌发的一个因素。低盐度 (2 ppt) 的硬度约为240 mg/L，而人工制备的海水为15ppt和30ppt，硬度分别约为787mg/L和1575mg/L。据报道，钙是激活许多细胞事件的重要第二信使，钙流入可能部分负责在较高盐度下，激活微孢子孢子萌发。

四、结论

      我们的研究结果表明，已知感染EHP虾的粪便，可以用作可靠的传染源。并且，EHP感染可在低盐度（即2ppt）下发生，但是在30ppt盐度时感染率和严重程度较高。这些发现对EHP流行地区的疾病管理具有重要意义。

      肝胰腺微孢子虫病 (HPM) 是由细胞内微孢子虫肝对虾肠胞菌 (EHP) 引起的，已在几种对虾中报道，包括：斑节对虾和南美白对虾。并且，EHP已在不同地区报告，包括：中国、印度尼西亚、马来西亚、越南、泰国和印度等亚洲国家。最近，位于西半球的委内瑞拉也报道了EHP。

一、首次研究确定：虾便可能成为EHP传染途径

      EHP在肝胰腺 (HP) 小管上皮细胞中引起病变，其主要临床症状是：生长缓慢，导致大小不一。漂浮在池塘水面上的白便和虾胃肠道变白色，也与EHP相关。在疾病的晚期，感染EHP的虾通常表现出：软壳、嗜睡、摄食量减少、空肠空道和慢性死亡。

      在已报告EHP的国家，如：印度、中国、越南和委内瑞拉，对虾养殖是在广泛的环境条件下进行的，包括：沿海海域、河口地区和内陆地区。例如，在印度东部的一些州，如：安得拉邦，池塘充满了与河口水混合的钻井水，导致养成池塘的盐度在0到30ppt之间波动，平均盐度约10ppt。相比之下，在该国西部的各州，如：古吉拉特邦，池塘水中的盐度可能在30至44ppt之间变化。在委内瑞拉西北部，一些养虾场位于马拉开波湖周围，那里的盐度在2到5ppt之间，而在委内瑞拉东北部，池塘的盐度介于20至40ppt之间，据报道，在高盐度和低盐度环境中都存在EHP。在这两个国家，高盐环境下EHP的发病率似乎更高，但迄今为止还没有研究评估盐度与EHP存在之间的可能关系。

      今天，笔者报告了一项研究的结果，以三种不同的盐度比较了EHP的感染性。

二、研究设置

      1、生物测定在亚利桑那大学的水产养殖病理学实验室 (UA-APL) 进行。无特定病原体 (SPF)南美白对虾购自美国佛罗里达州的一家商业孵化场。过去两年，在UA-APL对SPF虾苗进行了筛查，没有发现包括EHP等疾病。

      2、研究分为两个的EHP挑战，在这两个挑战中，虾都维持在2ppt、15ppt和30ppt三种不同的盐度下。对于每个实验挑战，六个90升的水箱中装满了对应于三个盐度水平的人造海水，每种盐度有2组池塘。每天早上测量温度调整为25摄氏度 (±0.6)；每周测量一次pH值，范围为7.5-8.0。

      3、在每个水箱中分别抽取10尾SPF南美白对虾（2.0-2.1 克）用于实验EHP感染。

三、结果与讨论

      1、我们调查了三种盐度中EHP的患病率和严重程度：在实验室受挑战的条件下：高 (30ppt)、中 (15ppt) 和低 (2ppt)。组织病理学和 PCR 证实，在实验挑战中用作EHP接种源的粪便，足以让不同盐度下的虾生病。这项研究的结果提供了一种通过粪-口途径感染EHP的新方法。

      2、EHP挑战结束时的最终存活率很高，从90%到100%，在两个独立实验挑战的三个盐度中（表1）。在两个独立的挑战实验中，在所有盐度中，对照处理的存活率都是 100%。在3种不同盐度下，我们没有观察到暴露于EHP的虾的任何临床症状。

      3、挑战1中2ppt、15ppt和30ppt盐度的EHP的患病率分别为25%、33.3%和25%。在挑战2中，EHP在2ppt、15ppt和30ppt的患病率分别为33.3%、30.0%和87.5%。在第二个实验中，盐度为30ppt时严重程度更高。在挑战2中，30ppt的EHP感染虾群中有50%表现出G3级（中度至重度）和G4级（重度）病变。我们发现盐度与感染EHP的虾之间存在很强的关联，暴露于高盐度（30 ppt）的虾中EHP的患病率高于暴露于低盐度的虾（2ppt和15ppt的总和）。本研究中不同的严重程度如图1所示。

      4、以前的研究表明，一些感染途径包括同居、反向灌胃和直接肝胰腺注射EHP接种物。在这项研究中，我们首次报道了粪便可能是一种传染性污染途径。由于有害的行为和粪便中未消化的饲料（可能约为25%-30%）的存在，可以增加EHP的传播。

      5、维持在30ppt盐度的虾的组织学损伤更为严重。在50%受影响的虾中发现了中度至重度感染 (G3-G4)。相比之下，在盐度为2ppt的虾中，只有16%的虾表现出G3级感染水平，而在盐度为15ppt的虾中，只有0%的虾表现出G2-G4 级感染水平。三种不同盐度下EHP感染严重程度的差异，可能是由于盐度对孢子萌发的不同影响。孢子萌发的关键阶段之一是孢子内渗透压的增加。与30ppt的高渗环境相比，盐度的差异导致2ppt和15ppt 的低渗环境。

      6、硬度是本研究中使用的三种盐度不同的另一个变量，可能是影响孢子萌发的一个因素。低盐度 (2 ppt) 的硬度约为240 mg/L，而人工制备的海水为15ppt和30ppt，硬度分别约为787mg/L和1575mg/L。据报道，钙是激活许多细胞事件的重要第二信使，钙流入可能部分负责在较高盐度下，激活微孢子孢子萌发。

四、结论

      我们的研究结果表明，已知感染EHP虾的粪便，可以用作可靠的传染源。并且，EHP感染可在低盐度（即2ppt）下发生，但是在30ppt盐度时感染率和严重程度较高。这些发现对EHP流行地区的疾病管理具有重要意义。